即用稀释液,用于减少HAMA(人抗小鼠抗体)、类风湿因子、非特异性结合、交叉反应和基质效应引起的干扰。
免疫分析中的干扰可导致检测中产生假阳性和假阴性结果,各种干扰日益普遍的原因有很多:
● 人口老龄化
● 越来越多的患者患有慢性自身免疫性疾病、过敏性和炎症性疾病
● 现有分析方法的检测水平限制
● 更多夹心分析法的应用
干扰可以根据其生化原因和对测定性能的影响分以下类:
1.病人样本中抗体引起的干扰
例如患者样本中的HAMA(人抗鼠抗体)、HAAA(人抗动物抗体)、嗜异性抗体和类风湿因子
2.样本中内源性成份引起的干扰
例如白蛋白、补体、溶菌酶、纤维蛋白原、α-1抗胰蛋白酶、非典型性高脂、高盐、高糖等
3.测定成份引起的干扰
测定成份如荧光或酶标记物,可以与样本中的物质发生交叉反应或者改变检测抗体的结合特性。
图A: 没有干扰的正常夹心分析结果→结果正确
图B: 干扰抗体桥联捕获抗体和检测抗体→假阳性结果
图C: 干扰抗体与捕获抗体结合→假阴性结果
图D: Assay Defender®阻止干扰抗体结合→正确结果
Assay Defender®能够有效地消除各种干扰,并有助于防止产生假阳性或假阴性结果。
Assay Defender®可以有效防止干扰样品的假阳性结果
样本1和样本2是来自类风湿性疾病患者的血清样本,用Elisa实验检测样本中肝癌标记物hAxl,样本3是来自健康供体的无干扰样本。样本用PBS-T/BSA, LowCross-Buffer, 市面上商业化HAMA阻断剂1,2,3,以及Assay Defender稀释,实验发现单独使用Assay Defender®可以完全消除干扰,因此在两种干扰样本中都能得到真正的阴性结果(<25 ng/mL)。无干扰样本的结果不受Assay Defender®的影响。
Assay Defender®的使用
Assay Defender®可用于使用捕获和(或)检测抗体的免疫分析,特别适用于人或动物样本中含有HAMA(人抗鼠抗体)或其他HAAA(人抗动物抗体)的免疫分析。
Assay Defender®是一款用于人体或者动物体液样本的即用型稀释液,使用简单,直接用Assay Defender®替代以前的稀释液即可。校准品也需用Assay Defender®稀释。样本稀释比可以1:2或更高。大多数应用的有效稀释比为1:10(1份样本+9 份Assay Defender®)
Assay Defender®的使用示例
1. ELISA检测
Assay Defender®替代普通样本稀释液。样本与Assay Defender®至少1:2稀释,若有可能1:10(1份样本+9份Assay Defender®)
如果分析物浓度高,可用更高稀释度。Assay Defender®作为样本稀释液也适用于免疫PCR和蛋白质芯片。
2. Lateral Flow Assay侧向层析检测
Assay Defender®替代流动缓冲液或淋洗液。
3. 带样本稀释液的微球平台
Assay Defender®替代普通样本稀释液,稀释比取决于分析物的浓度。
4. 不带样本稀释的微球平台
Assay Defender替代捕获和检测微球的保存缓冲液。